Annexin V-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒/100T

Annexin V-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒（Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit）是用FITC標記了的Annexin V作為探針，來檢測細胞早期凋亡的發生，可用熒光顯微鏡、流式細胞儀或其他熒光檢測設備進行檢測。

其檢測原理為：在正常的活細胞中，磷脂酰絲氨酸（phosphotidylserine，PS）位于細胞膜的內側，但在早期凋亡的細胞中，PS 從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面，暴露在細胞外環境中。Annexin-Ⅴ（膜聯蛋白-V）是一種分子量為35-36KD的Ca²⁺ 依賴性磷脂結合蛋白，能與PS高親和力結合?？赏ㄟ^細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。

另外，本試劑盒中還提供了碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）用來區分存活的早期細胞和壞死或晚期凋亡細胞。PI是一種核酸染料，它不能透過正常細胞或早期凋亡細胞的完整的細胞膜，但可以透過凋亡晚期和壞死細胞的細胞膜而使細胞核染紅。因此，將Annexin V與PI聯合使用時，PI 則被排除在活細胞（Annexin V-/PI-）和早期凋亡細胞（Annexin V+/PI-）之外，而晚期凋亡細胞和壞死細胞同時被FITC 和PI 結合染色呈現雙陽性（Annexin V+/PI+）。

·         Annexin V-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒運輸與保存方法

冰袋（wet ice）運輸。本試劑盒中所有組分均在4℃保存，Annexin V-FITC、PI需避光保存。長期不用可將Annexin V-FITC放到-20 oC保存。

注意事項Annexin V-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒

1) 由于細胞凋亡是一個快速的過程，建議樣品在染色后1小時之內進行分析。

2) 對于貼壁細胞，消化是一個關鍵步驟。貼壁細胞誘導細胞凋亡時如有漂浮細胞，需收集漂浮細胞和貼壁細胞后合并染色。處理貼壁細胞時要小心操作，盡量避免人為的損傷細胞。胰酶消化時間過短，細胞需要用力吹打才能脫落，容易造成細胞膜的損傷，PI攝入過多；消化時間過長，細胞膜同樣易造成損傷，甚至會影響細胞膜上磷脂酰絲氨酸與Annexin V-FITC的結合。消化時將胰酶鋪滿孔板底后，輕搖時胰酶與細胞充分接觸，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段時間，待細胞間空隙增大，瓶底呈花斑狀即可終止。在消化液中盡量不用EDTA，EDTA會影響Annexin V與PS的結合。

3) 實驗中如需要固定細胞，比如在檢測凋亡的同時檢測細胞周期，只能選用Annexin V-FITC，而不能選用Annexin V-EGFP，因為在固定過程中EGFP會變性導致喪失激發熒光的能力。固定前需要先將細胞與Annexin V-FITC進行孵育，并用binding buffer洗掉未結合的Annexin V-FITC。因為固定過程中細胞通透性增加會產生細胞碎片，可以和Annexin V結合，對結果產生干擾。

 4) 如果樣品來源于血液，請務必除去血液中的血小板。因為血小板含有PS，能與Annexin V結合，從而干擾實驗結果?？梢允褂煤?/span>EDTA的緩沖劑并在200 g離心洗去血小板。

5) 試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

6) Annexin V-FITC和PI是光敏物質，在操作時請注意避光。