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型號:invitrogen 11668-019

脂質體2000,lip2000,Lipofectamine&amp

描述:供應:invitrogen Lipofectamine™ 2000 Transfection Reagent,lip2000,脂質體2000 貨號: 11668-027(0.75ml) 11668-019(1.5ml) 保存條件:4℃ 保質期:3年

  • 廠商性質

    經銷商
  • 更新時間

    2022-09-29
  • 訪問量

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詳細介紹

Lipofectamine™ 2000轉染試劑是一種陽離子脂質體,在體外可以轉染許多種哺乳動物細胞,對各類細胞系都可提供zui高的轉染效率,具有高效性和操作步驟簡單的優點。脂質體2000其轉染效率以及細胞活性取決于許多實驗因素,如細胞密度、脂質體和DNA的濃度、脂質體2DNA復合物的作用時間以及是否有其它介質成分如抗生素和血清。

使用Lipofectamine™ 2000試劑,您可以獲得:
*在多種細胞系中具有*地轉染效率和較高水平地重組蛋白表達
*傳輸siRNA的優異性能
*在有血清存在的情況下可保證轉染效力——轉染后無需更換培養基
*保證可以用于高通量應用的試劑
*用于建立穩定細胞系的可靠試劑Lipofectamine™ 2000試劑為大多數細胞提供了zui高的轉染效率和活性。當存在血清或用于進行蛋白表達的細胞系(如COS-7,CHO和293)時,Lipofectamine™ 2000尤為有效,效率可超過90%。

脂質體2000操作流程     
事實上Lipofectamine系列產品操作流程都是又快又簡單:稀釋DNA以及Lipofectamine 2000,混合2種稀釋液保溫20分鐘,加入培養細胞中孵育24-96小時檢測結果。下面是Invitrogen提供的詳細流程和注意事項。
1、轉染前一天,胰酶消化細胞并計數,細胞鋪板,使其在轉染日密度為90%。細胞鋪板在0.5ml含血清,不含抗生素的正常生長的培養基中。
2、對于每孔細胞,使用50μl無血清培養基(如OPTI-MEMⅠ培養基)稀釋0.8μg-1.0μg DNA。
3、對于每孔細胞,使用50μl OPTI-MEMⅠ培養基稀釋1μl-3μl LIPOFECTAMINE2000試劑。Lipofectamine 2000稀釋后保溫5分鐘(在30分鐘內同稀釋的DNA混合。保溫時間過長會降低活性。) 注意:即使Lipofectamine 2000使用OPTI-MEMⅠ稀釋,細胞也可以使用D-MEM培養。如果D-MEM做為Lipofectamine 2000的稀釋液,必須在5分鐘內同稀釋的DNA混合。
4、混合稀釋的DNA(第2步)和稀釋的Lipofectamine 2000(第3步)。在室溫保溫20分鐘。 注意:溶液可能會混濁,但不會影響轉染。復合物可以在室溫保持6小時穩定。
5、直接將復合物加入到每孔中,搖動培養板,輕輕混勻。注意:如果在無血清條件下轉染,使用含血清的正常生長培養基進行細胞鋪板。在加入復合物前移去生長培養基,替換為0.5ml無血清培養基。
6、在37℃,5%的CO2中保溫24-48小時,無須去掉復合物或更換培養基或者在4-5小時后更換生長培養基也不會降低轉染活性。
7、在細胞中加入復合物24-72小時后,分析細胞抽提物或進行原位細胞染色,檢測報告基因活性。這依賴于細胞類型和啟動子活性。對穩定表達,在開始轉染一天后將細胞傳代至新鮮培養基中,兩天后加入篩選抗生素。進行穩定表達需要數天或數周。
8、對于96孔板培養,不再需要提前一天進行細胞鋪板,而可以直接在平板中制備復合物,然后將細胞懸浮液加入到復合物就可以了,這樣進一步減少了轉染時間。這種改進步驟已經過293-H,293-F,COS-7L和CHO細胞的試驗,同傳統方法相比活性稍低??旖莸牟襟E和蛋白表達細胞系的高效轉染使得Lipofectamine 2000非常適用于96孔板的高通量轉染,比如cDNA文庫的篩選和蛋白瞬時表達。

脂質體2000適用細胞株范圍
不同的轉染試劑所適用的細胞株范圍各不相同。一個實驗室常常會用到不止一種細胞株,甚至是比較特殊的細胞株。一個轉染試劑所適用的細胞株越多,當然越受用戶的歡迎。根據Invotrogen的資料,Lipofectamine2000已經證實可用于高達517種細胞株,覆蓋了相當廣的范圍。要看看Lipofectamine 2000是否適用于你現有的細胞株,可以訪問以下Invitrogen(http://www.invitrogen.com/content.cfm?pageID=9559&fuseaction=CellLines.dsp_searchRange)

適用的核酸類型和DNA大小
有的轉染試劑是為siRNA轉染而設計的,有的則是為DNA轉染設計。Lipofectamine 2000可以適用于包括DNA,siRNA,dsRNA, 熒光標記的Oligo, RNA等在內的核酸轉染,這使得Lipofectamine2000適用范圍非常廣泛,無論是基因表達分析的DNA轉染,或者是RNAi,Lipofectamine 2000都能勝任,不需要為不同目的購買不同試劑了。但,zui常用的DNA轉染中有一個DNA大小的問題,太大的質粒不那么好轉。

脂質體2000用量
Lipofectamine 2000用的劑量根據說明書,24孔板轉染每次用2ul左右,1.5ml Lipofectamine 2000大約可做750次24孔板轉染,或者大約150次6孔板轉染。

注意事項     
Lipofectamine2000要求細胞鋪板密度較高,以90%-95%為佳,這有助于減少陽離子脂質體細胞毒性造成的影響。Lipofectamine 2000可用于有血清培養基的轉染,并且轉染前后不需要換培養基,使得操作方便了許多,但是要注意制備轉染復合物時要求用無血清培養基稀釋DNA和轉染試劑,因為血清會影響復合物的形成。
 
復合物形成后是可以加入血清。這里要特別注意檢測所用的無血清培養基是否能和Lipofectamine 2000匹配,比如已知CD293, SFMII,VP-SFM就不行。此外還應該留意,如果研究的基因要求比較長的表達時間,比如細胞周期相關基因,或者時細胞表面蛋白,選擇細胞鋪板密較低的轉染試劑,不適合用Lipofectamine 2000。

對于大多數陽離子脂質體試劑,應優化DNA濃度和陽離子脂質體試劑量以得到zui大的轉染效率。DNA和轉染試劑的比例,通常推薦是1:2或者1:3,優化可以從0.5-5之間慢慢試。使用小劑量確定的優化條件可以用于進行大劑量的轉染,只要根據培養板表面比例線性增加鋪板細胞的數目、陽離子脂質體試劑和DNA量就可以了。
 
還有轉染的時候培養基中不能添加抗生素??股?,比如青霉素和鏈霉素,一般對于真核細胞無毒,但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性,使抗生素可以進入細胞。這降低了細胞的活性,導致轉染效率低。所以,在轉染培養基中不能使用抗生素,甚至在準備轉染前進行細胞鋪板時也要避免使用抗生素。這樣,在轉染前就不必潤洗細胞。對于穩定轉染,不要在選擇性培養基中使用青霉素和鏈霉素,因為這些抗生素是GENETICIN選擇性抗生素的競爭性抑制劑。另外,為了保證無血清培養基中細胞的健康生長,使用比含血清培養基更少的抗生素量。
 
陽離子脂質體應該在4度保存,要注意避免多次反復長時間開蓋,因為可能會導致脂質體氧化而影響轉染效率。當然還有要注意質粒的質量,質粒的內毒素是轉染的大敵。
 

本公司還提供以下產品:

特級胎牛血清(Fetal Bovine Serum, Certified)  gibco16000-044 美洲血源  500ml *
優級胎牛血清(Fetal Bovine Serum, Qualified)  gibco10099-141 澳洲血源  500ml *

特級胎牛血清 Fetal Bovine Serum (FBS)  產地:美國  HyClone SH30070.03  500ml *
胎牛血清(Fetal Bovine Serum) HyClone SV30087.02 南美血源 500ml *
胎牛血清(Fetal Bovine Serum) HyClone SV30087.01 南美血源 100ml *
供體馬血清 HyClone SH30074.02   100ml *優質胎牛血清(Fetal Bovine Serum Gold)  PAA A15-151 500ml *

普通胎牛血清(Fetal Bovine Serum Standard Quality) PAA A15-101 500ml *

Hyclone 30087.01(南美普通胎牛血清)100ml
Hyclone 30087.02(南美普通胎牛血清)500ml
Hyclone 30084.03(澳洲血源)500ml
Hyclone 30070.03(北美特級胎牛血清)500ml
Hyclone 30396.03(加拿大血源)500ml
Gibco 16000-044(美洲血源)500ml
Gibco 10099-141(澳洲血源)500ml
Gibco C2027050 (南美烏拉圭)500ml
Gibco 16141-079 胚胎干細胞胎牛血清 500ml
PAA A15-101 德國PAA 普通胎牛血清 500ml
PAA A15-151 德國PAA 優級胎牛血清 500ml
美國GIBCO 26400-044 (GIBCO透析型胎牛血清) 500ml
美國GIBCO 16141-079 (GIBCO干細胞胎牛血清) 500ml
美國GIBCO 16140-071 (GIBCO滅活過胎牛血清) 500ml
美國GIBCO 10439-024 (GIBCO胚胎干細胞胎牛血清) 500ml
SH30070.03E (Hyclone干細胞胎牛血清) 500ml
SH30068.03(Hyclone活性炭處理胎牛血清) 500ml

沃比森生物是一家主要從事細胞培相關產品,分子生物學試劑,微生物試劑,,各種動物ELISA試劑盒,生物實驗服務等研發與銷售的高科技生物公司,訂購:,業務咨詢 :

 

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