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脂質體2000轉染細胞實驗材料及操作步驟

發表時間:2014-12-05  |  點擊率:1757
 一、脂質體2000轉染細胞實驗材料:
 
1、Vero細胞
 
2、轉染級質粒
 
3、DMEM細胞培養液:無血清DMEM、10%血清DMEM
 
4、脂質體2000
 
5、6孔細胞培養板
 
二、脂質體2000轉染細胞實驗操作步驟:(以6孔板為例予以說明)
 
1、細胞鋪板:轉染前一天進行鋪板,第二天待細胞長成單層即可進行轉染。(Vero細胞按一傳三的比例進行傳代,一般10~12h即可。)
 
2、溶液1:240ul無血清DMEM+10ullipofectamine2000perwell(總體積250ul)(溫育5min)
 
3、溶液2:無血清DMEM+4ug質粒perwell(總體積250ul)(根據質粒濃度確定DMEM的體積,但保證總體積為250ul)
 
4、將溶液1與溶液2混合,室溫下置20min。
 
5、與此同時,將6孔板中的細胞用無血清DMEM沖洗細胞兩遍后,加入1.5ml無血清培養基。
 
6、將溶液1與溶液2的混合液逐滴加入孔中,搖動培養板,輕輕混勻。在37℃、5%的CO2培養箱中培養5~6小時。
 
7、6小時后,更換10%血清的DMEM,在37℃、5%的CO2培養箱中培養48~72h檢測轉染水平。

TEL:13811479844

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